一、产品简介：

　　毁伤组150±50 nm的亚微米COD与毁伤组Vero细胞的粘附才气明明强于对比组COD和Vero细胞，十分是正在前6h。结果，粘附正在细胞表面的COD微晶量明明推广，zeta电位升高，荧光强度下降，由于OPN分子被COD笼罩，死灭细胞不行平常事务。

　　本琢磨旨正在琢磨尺寸为150±50 nm的亚微米草酸钙二水合物（COD）与非洲绿猴肾上皮细胞（Vero细胞）毁伤前后的粘附特性，并探求肾结石酿成的机造。手段 Vero细胞被过氧化氢氧化毁伤，以筑树毁伤细胞的模子。应用扫描电子显微镜考察Vero-COD粘附。采用电感耦合等离子体发射光谱法定量测定粘附COD微晶的量。采用纳米颗粒尺寸领会仪和激光扫描共聚焦显微镜划分测定了粘附流程中Vero细胞表面zeta电位的变动和骨桥卵白表达的变动。通过丈量粘附流程中丙二醛含量和细胞生气的变动来评估细胞毁伤秤谌。结果毁伤组Vero细胞对COD微晶的粘附才气明明强于对比组Vero细胞。粘附到COD后，细胞生气低落，丙二醛含量和细胞表面zeta电位均推广，骨桥卵白的荧光强度下降，由于骨桥卵白分子被COD告成笼罩。亚微米COD正在粘附流程中进一步粉碎了细胞，十分是关于对比组中的Vero细胞，导致附着的微晶量推广。结论亚微米COD会正在粘附流程中进一步毁伤受伤的Vero细胞。附着的微晶的量与细胞毁伤的水平成正比。粘附正在受伤的上皮细胞上的微晶量的推广正在早期肾结石的酿成中起紧要感化。闭节词：细胞调整， 晶体粘附， 草酸钙二水合物， 肾结石， 病理矿化肾结石的手术调治赢得了长足的发展。然而，肾结石的发病率和复发率已经很高。肾结石的首要因素是草酸钙（CaOxa）;它正在康健人尿液中的浓度比没有酿成肾结石时的熔解度高四倍。所以，尿石盐的过饱和度是肾结石酿成的先决前提，但不是独一的央求。 尿液流经肾幼管的时候可能依照肾幼管直径和长度以及尿液的流速来谋划。研讨到CaOxa正在尿液中的孕育速率，游离的单微晶不行正在流经幼管的短时候内长成梗阻幼管所需的巨细。3 惟有固定正在肾幼管上皮细胞表面的游离尿微晶才干孕育并酿成结石。4 ,5 的确而言，尿微晶与肾幼管上皮细胞之间的粘附是肾结石酿成的闭节流程。肾幼管上皮细胞毁伤是鼓吹尿微晶粘连的紧要条件。4 ,6 正在分子和超分子秤谌上，肾幼管上皮细胞膜的机闭正在CaOxa微晶，高浓度的草酸或其他成分惹起的毁伤后发作变动。比如，细胞膜内带负电荷的磷脂酰丝氨酸将变为表翻，CD44和透后质酸将正在细胞表面表达。7 –9 这些变动为尿液微晶的成核和孕育供给了有用的位点，鼓吹了早期微结石的酿成，也加强了细胞膜与尿微晶之间的粘附，加快了肾结石的酿成。 CaOxa一水合物（COM）是CaOxa最热力学安静的晶型。可是，Ca2+和奥克萨2−因为 COM 与肾幼管上皮细胞的粘附力更强，所以正在过饱和尿液中常浸淀为 CaOxa 二水合物 （COD），这会对细胞形成更急急的损害。所以，尿液中危机相对较幼的COD晶体的浸淀是生物体的一种自我维护。这也揭示了COD微晶与人体内肾幼管上皮细胞之间存正在粘附。 然而，目前对肾幼管上皮细胞与晶体粘附的琢磨首要纠合正在微米级COM和COD晶体上。6 , 11 惟有少数闭于尿液中纳米晶体的琢磨可用， 12 , 13 肾幼管上皮细胞与巨细幼于200nm的CaOxa晶体之间的互相感化尚未报道。毕竟上，尿液中存正在很多亚微米微晶，这些微晶是微米级晶体酿成的根源。所以，本琢磨琢磨了尺寸为150±50 nm的COD微晶与非洲绿猴肾上皮细胞（Vero细胞）的粘附，以进一步相识肾结石酿成的分子和细胞机造。

　　Vero细胞是从中国科学院上海细胞库进货的（由中国广州暨南大学生物医学琢磨与发达中央Yi-Fei Wang教导赠送）。Dulbecco的更正Eagle培植基：养分搀和物F12来自Thermo Scientific HyClone（犹他州洛根），Gibco复活儿幼牛血清来自Life Technologies（加利福尼亚州卡尔斯巴德）。骨桥卵白（OPN）和荧光素异硫氰酸酯二抗的一抗来自圣克鲁斯生物手艺（加利福尼亚州圣克鲁斯）。细胞增殖检测试剂盒（细胞计数试剂盒-8）来自Dojindo测验室（日本熊本）。MDA套件来自筑城生物手艺琢磨所（中国南京）。磐城细胞培植板来自AGC Techno Glass（日本千叶）。全盘其他试剂均为领会纯等级。®® XL-30处境扫描电子显微镜（SEM）来自飞利浦（荷兰埃因霍温）。纳米颗粒尺寸的zeta电位领会仪（Zetasizer Nano ZS）来自Malvern Instruments Ltd（英国莫尔文）。激光共聚焦显微镜（LSM;510 META duo scan）来自Carl Zeiss AG（德国Oberkochen）。酶符号仪器Safire™来自Tecan Group Ltd（瑞士曼内多夫）。Optima™ 2000 DV电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP）来自PerkinElmer（马萨诸塞州沃尔瑟姆）。粉末X射线衍射（XRD）结果正在D / max-γA X射线衍射仪（理学公司，日本东京）上应用镍过滤铜Kα辐射（λ = 1.54 Å）和2度/分钟的扫描速度正在40 kV，30 mA下记载。正在5度至60度2θ的规模内，发散和散射狭缝为1度。IFS25傅里叶变换红表光谱仪（FT-IR）来自布鲁克SA（法国Wissembourg）。扫描规模为 4000–400 cm®−1差别率为0.5厘米−1.CaOxa的样子依照King等人确定， 14 COD与美国测试和质料协会卡号17-541举办了对照。离心术来自Eppendorf（5804 R，德国）。

　　以亚硝基三乙酸为络合剂，采用络合浸淀法造备了亚微米COD晶体和COD悬浮液。即0.3 mol/L氯化钙与等量的亚硝基三乙酸搀和，然后以1 mL/min的速率参加0.3mol/L草酸钾，正在75°C下急迅搅拌。静置30分钟后，通过离心差别浸淀，用蒸馏水洗涤两次，然后真空干燥。通过SEM，XRD和FT-IR确定产物的性格。COD微晶的均匀尺寸为150±50 nm。应用终浓度为100μg/ mL的无血清培植基造备COD悬浮液。

　　测验如前所述举办。 15 将细胞悬浮液接种正在合意的平板中，并正在37°C下孵育24幼时，拥有5%的二氧化碳和饱和湿度。24幼时后，将培植基改换为无血清培植基，并将细胞孵育12幼时以完成同步（总孵育时候为36幼时）。然后将细胞分为A组和B组。A组（对比组）的细胞仅袒露于无血清培植基，而B组（毁伤组）的细胞用0.3mmol / L过氧化氢毁伤。向两组参加含有COD微晶（浓度为100μg/mL）的无血清培植基。正在粘附2，6，12，18和24幼时后，应用细胞计数Kit-8手段测定细胞生气。用MDA测尝尝剂盒测定丙二醛（MDA）含量。通过荧光定量法测定细胞表面的OPN表达。应用纳米颗粒尺寸领会仪测定COD晶体的zeta电位。通过SEM考察Vero-COD粘附，并通过ICP定量领会粘附COD微晶的量。

　　细胞 （2 × 105将细胞/mL）接种正在12孔板（1mL /孔）中，底部有盖玻片。正在分别培植时候用COD悬浮液共培植后，去除盖玻片，并用D-Hank溶液冲刷掉非粘附晶体。 关于SEM考察，用2.5%戊二醛正在4°C下固定盖玻片上的细胞和晶体24 h，正在乙醇梯度（30%，50%，70%，90%和100%）中脱水，用乙酸异戊酯从新固定，正在二氧化碳临界点下干燥，然后用金溅射照料。通过SEM考察到细胞和晶体之间的粘附。 为了举办ICP检测，将盖玻片取出并安排正在25 mL烧杯中。然后，参加10 mL硝酸和0.5 mL高氯酸，并将样品正在电炉上消化，直至酿成澄清溶液。将样品继续加热，直到高氯酸欣喜，冒烟并简直干燥。电炉的余热用于干燥样品，然后正在室温下冷却。今后向烧杯中参加3 mL水以熔解残留物。钙的浓度 2+ 正在溶液中应用ICP法举办丈量。依照Ca的浓度谋划闭联COD微晶的数目 2+ 离子，结果以μg/cm默示 2 .

　　维罗细胞 （4 × 105将细胞/ mL）接种正在六孔板（2mL /孔）中，然后用COD悬浮液共培植分别时候。用D-Hank溶液洗去非粘附晶体，参加含0.02%乙二胺四乙酸消解液的0.25%胰卵白酶。将细胞吹干成单细胞悬浮液，然后以1000rpm离心3分钟。除去上清液，然后将细胞和晶体重悬于1000μL D-Hank溶液（pH 7.86）中。将约800μL悬浮液注入样品池中，以应用纳米颗粒领会仪丈量zeta电位。

　　将Vero细胞接种正在六孔板（4×105细胞/ mL，2 mL /孔），底部有盖玻片，然后与COD悬浮液一齐孵育分别时候。如前所述，通过LSM用OPN一抗和荧光素异硫氰酸酯二抗考察到OPN表达。

　　应用IBM SPSS 16.0软件（SPSS Inc，芝加哥，IL）对测验结果举办了统计领会。应用Tukey测试领会测验组和对比组之间的均值不同。P0.05时不同明显，P0.01时不同极明显，P0.05时不同不明显。除ICP检测表，全盘测验起码独立举办三次。

　　图 1A 显示了亚微米COD晶体的SEM图像。与微米级的COD分别，极少亚微米COD没有显示出四角双金字塔的样板样子。COD的尺寸规模为100-200 nm，均匀约为150 nm。

　　图1 通过（A）扫描电子显微镜（比例尺= 1μm），（B）X射线衍射和（C）傅里叶变换红表光谱领会超细草酸钙二水合物微晶的容貌和构成。 通过XRD和FT-IR证理会所造备晶体的构成。XRD 形式 （图 1B ）声明这些晶体是COD晶体。图案中的晶面间距（d值）划分为0.873、0.618、0.442、0.278和0.224 Å，划分对应于COD的（110）、（200）、（211）、（411）和（213）平面。14 傅立叶变换红表光谱（图 1C 的晶体正在3453 cm处显示出猛烈的简单吸取峰。−1，这与3000厘米内崭露的COM晶体的多个峰有显着不同。−1至 3600 厘米−1拥有多个峰值的区域。16 错误称拉伸振动如（首席运营官−）的羰基崭露正在1647厘米处−1，而 us（首席运营官−） 崭露正在 1328 厘米处−1.两个峰值都证实惟有COD晶体的存正在。也便是说，XRD和FT-IR结果声明所造备的晶体是纯COD而且没有任何COM。

　　Vero细胞与0.3 mmol/L过氧化氢孵育1幼时后，受到氧化毁伤，惹起样子变动。对比组中的大无数Vero细胞出现出样板的纺锤形，拥有齐全完全的样子和微绒毛（ 图 2A ).然而，过氧化氢毁伤后细胞萎缩，伴有微绒毛（ 图 3A ).毁伤后，细胞生气由100%（对比组）低落到70.5%（P0.05）。

　　图2 扫描电镜图像（比例尺= 10μm）草酸钙二水合物与对比组中非洲绿猴肾上皮细胞粘附后（A）2幼时，（B）6幼时，（C）12幼时和（D）24幼时。

　　图3扫描电镜图像（比例尺= 10μm）正在（A）2幼时，（B）6幼时，（C）12幼时和（D）24幼时与毁伤组中的非洲绿猴肾上皮细胞粘附后草酸钙二水合物。 正在SEM插图中没有考察到交汇点配合物。此结果或者归因于以下起因。最先，正在样品造备流程中过程一系列洗涤，脱水和干燥后，样品始末了细胞耗费和细胞尺寸减幼。极少严密的道口也断裂了。其次，为了澄清细胞 - 晶体粘附的细节，极少细胞相对稀少的区域被人工地拣选然后影相。第三，内吞感化早正在细胞袒露于晶体后30分钟就发作了。 17 正在内吞感化时刻，酿成的细胞 - 晶体复合物宛若与单层差别，而且正在细胞 - 细胞接触区域崭露大间隙。

　　图4A 显示了Vero细胞和亚微米COD之间粘附流程中细胞生气的变动。跟着粘附时候从0 h推广到24 h，对比组Vero细胞生气从100%低落到52.4%（P0.01），而毁伤Vero细胞的存活率从70.5%低落到49%（P 0.01）。结果证实，COD微晶正在粘附流程中对细胞形成进一步的毁伤，从而下降了细胞生气。十分是，对比组Vero细胞的存活率正在0~6幼时内急速低落，证实COD对对比组Vero细胞形成急急毁伤。

　　图 4 （A）细胞生气，（B）丙二醛含量，（C）骨桥卵白表达和（D）玉米卵白电位正在节造组和毁伤组中草酸钙二水合物微晶和非洲绿猴肾上皮细胞粘附流程中的变动。 注：*P 0.05;P0.01与未袒露于草酸钙二水合微晶的细胞比拟。# 缩写：h，幼时;MDA，丙二醛。然而，以前的讲述显示，COD微晶只会对细胞爆发细幼的损害或没有损害，COD以至可能鼓吹细胞增殖。19 , 20 正在这些讲述中，拣选0幼往往的细胞生气行为空缺值。因为细胞（搜罗对比组和毁伤组）拥有较强的自修复才气和自增殖才气，跟着粘附时候的推广，自增殖的细胞生气值推广。它以至大于COD诱导的细胞毁伤惹起的生气值下降。这种情景导致正在必然时候内粘附到COD后，细胞生气出乎料思地加强，从而得出“COD微晶可能鼓吹细胞增殖”的结论。19 , 20 毕竟上，对COM微晶的琢磨也显示了似乎的结果。19 , 21 然而，正在这项琢磨中，细胞生气的空缺值是正在没有微晶增添的处境下孵育24幼时后的空缺值。分别粘附时候（24、18、12、6 和 2 幼时）的测验划分从 0、6、12、18 和 22 幼时劈头。正在24幼时，终止全盘粘附测验，同时测定每组的细胞生气。通过这种策画，结果可能反应COD微晶对细胞生气的影响，由于细胞自增殖的影响正在很大水平上被消亡。暂时琢磨结果与先前琢磨结果之间的不同 19 , 20 也或者归因于其他起因。比如，分此表细胞系正在与CaOxa晶体互相感化时或者出现分别。正在以前的琢磨中，应用了人肾-2细胞和Madin-Darby犬肾细胞，19 , 20 而Vero细胞用于目前的琢磨。其余，还应用了分别尺寸的CaOxa晶体。先前琢磨中应用的晶体的均匀尺寸划分超出20μm和0.7（0.4-2.0）μm， 19 , 20 两者都比暂时琢磨中应用的亚微米晶体大得多。所以，测验结果（ 图 4A ）与前几次讲述的结论齐全分别。 19 , 20

　　粘附流程中MDA含量的丈量进一步增援了COD微晶或者毁伤Vero细胞的结论。结果显示正在图 4B . 粘连前（即0 h时），对比组Vero细胞开释的MDA含量为2.91 nmol/mL，毁伤组增至8.06 nmol/mL（P0.01）。MDA含量升高是细胞氧化毁伤的明明征兆。 22 , 23 该结果与细胞生气测定（ 图 4A ），这通过过氧化氢对Vero细胞的明明毁伤感化获得声明。 关于毁伤组中的Vero细胞，MDA含量正在粘附到COD微晶的流程中继续推广，这证实亚微米COD可能继续对细胞爆发新的毁伤。 关于对比组的Vero细胞，正在与COD微晶粘附2幼时后，MDA含量从2.91 nmol/mL急速推广到8.85 nmol/mL（P0.01）。这一发觉证实，COD微晶对对比组的Vero细胞形成明明的毁伤。2幼时后，MDA含量慢慢上升，变动趋向与毁伤组一致。这些数据显示，2幼时后，对比组COD和Vero细胞之间的粘附流程与毁伤组一致。 正在与COD微晶粘附流程中，毁伤Vero细胞中的MDA含量凡是高于对比组。这一结果证实，受伤的Vero细胞受损更急急，并受到更强的氧化刺激。

　　OPN是一种磷酸化糖卵白，拥有充足的唾液酸，分子量为60-80 kDa。 24 , 25 OPN是肾结石中紧要的有机基质之一。动物测验和细胞模子测验都证实，OPN表达可能鼓吹肾结石的酿成。 24 通过LSM考察了VERO-COD粘附流程中OPN的表达。LSM图像是反复三次反复的测验的总体均匀结果。拥有代表性的LSM图像显示正在 图 5 和 6 ，定量领会结果显示正在 图 4C .

　　图 5 激光扫描共聚焦显微镜图像（630×）显示，正在（A）0幼时，（B）6幼时，（C）12幼时和（D）24幼时草酸钙二水合物与对比组中的上皮细胞粘附后，非洲绿猴肾上皮细胞上骨桥卵白的荧光变动。注意：细胞核为蓝色，表达的骨桥卵白为绿色。

　　图 6 激光扫描共聚焦显微镜图像（×630）显示，正在（A）0幼时，（B）6幼时，（C）12幼时和（D）24幼时草酸钙二水合物与毁伤组中上皮细胞粘附后，骨桥卵白对非洲绿猴肾上皮细胞的荧光变动。注意：细胞核为蓝色，表达的骨桥卵白为绿色。 更多的OPN分子正在粘附前由毁伤组中的Vero细胞表达（ 图5A和6安培 ），相对表达秤谌为1134（P0.01），远高于对比组Vero细胞的相对OPN表达秤谌321。

　　如 图 5 OPN正在0~6 h时细胞表面的荧光强度随粘附时候的推广而推广，6 h时到达最大值902（P 0.01）。这一发觉或者归因于粘附劈头时COD诱导的毁伤秤谌高，导致OPN分子正在Vero细胞上的表达升高和荧光强度加强。该结果与细胞生气（ 图 4A ） 和 MDA 丈量值 （ 图 4B ). 正在6-24幼时，OPN的荧光强度下降（ 图 4C ）由于富含正在Vero细胞表面的OPN分子粘附正在COD上，导致OPN分子与荧光抗体的集合节减，从而减弱OPN荧光强度。

　　如 图 6 0~6 h时，OPN正在细胞表面的荧光强度渐渐削弱，6 h时到达602（P0.05），与对比组的变动趋向齐全相反。这一发觉的起因是受损细胞高度表达的OPN分子拥有绝顶强的粘附才气，而且可能正在相对较短的时候内（6幼时）齐全粘附COD到饱和粘附形态。当OPN分子被COD粘附时，可能与荧光抗体集合的袒露OPN分子会节减，导致荧光削弱。OPN产量的节减也是由细胞死灭惹起的，细胞死灭不行平常事务。26 受损细胞的凋亡和坏死率划分为4.6%和1.4%。这些数据都高于对比细胞（2.8%和1.31%）。 27 细胞生气、MDA含量和OPN表达秤谌的结果证实，亚微米COD正在粘附流程的前6幼时内会急急损害Vero细胞。这一结论与以前的讲述纷歧概。19 – 21 肾上皮细胞袒露于CaOxa晶经验推广单核细胞化学吸引卵白-1和前哨腺素的合成，两者已知都列入炎症流程。28 所以，除了上述分别空缺值的拣选表，这种纷歧概也可能归因于Vero细胞对亚微米COD（150±50nm）的强内吞才气，这很容易诱导炎症响应。跟着附着时候的耽误，亚微米COD渐渐集合成微米级晶体（ 图 2 和 3 ），从而节减其细胞毁伤效应。

　　Zeta电位是细胞-细胞和细胞-表部粒子互相感化的闭节参数。细胞和表部颗粒之间的互相感化水平可能通过zeta电位丈量来确定。 29 , 30 然而，惟有少数琢磨应用zeta电位丈量琢磨了细胞与CaOxa之间的互相感化。 15 图 4D 显示了Vero细胞和COD微晶粘附流程中细胞表面的zeta电位变动。正在粘附之前（即正在0幼往往），对比组和毁伤组中Vero细胞的zeta电位划分为-11.6 mV和-15.2 mV（P 0.01）。这一发觉或者归因于两个起因。最先，毁伤后细胞表面带磷脂酰丝氨酸，OPN和透后质酸等带负电荷的分子的浓度推广。其次，正在氧化毁伤后，细胞膜上的极少不饱和脂肪酸被氧化成拥有羟基和羧基的衍生物，推广了细胞表面的负电荷密度。所以，受伤细胞表面zeta电位的电荷比对比组更负。 关于对比组和毁伤组的Vero细胞，细胞表面zeta电位正在所有晶体粘附流程中呈上升趋向。这一发觉证实，粘附正在细胞表面的COD微晶的量与粘附时候呈正闭联。粘附正在细胞表面的COD微晶越多，笼罩的带负电荷的分子（比如 图 5 和 6 ）并下降电池表面上负电荷的密度。所以，zeta的潜力会更高。 毁伤组Vero细胞上zeta电位的推广速率疾于对比组，十分是正在0-6幼往往。这一发觉证实COD与受损Vero细胞之间的集合速率更疾，而且受损Vero细胞上粘附的COD微晶量更大。十分是，正在粘附的前6幼时内，受损Vero细胞上COD微晶的粘附量显着高于对比组Vero细胞，这与SEM考察结果一概（ 图 2 和 3 ).

　　通过SEM考察COD微晶正在对比组和毁伤组Vero细胞上的粘附。结果显示正在 图 2 和 3 .

　　正在2-6幼往往，惟有少量的COD微晶粘附正在细胞表面（ 图 2A 和 B ).其余，虽然保存了纺锤体形态，但考察到细胞形态的细幼变动。这一发觉证实，对比组COD微晶与Vero细胞的粘附才断气顶弱。 可是，正在 12 幼时（ 图 2C ） 和 24 幼时 （ 图 2D ），COD微晶的粘附量明明推广，细胞劈头减弱。

　　毁伤组Vero细胞与COD微晶的粘附才气明明强于对比组。跟着粘适时候的推广，粘合量急速推广（ 图 3 ).十分是，正在 12 幼时（ 图 3C ） 和 24 幼时 （ 图 3D ），很多COD微晶粘附正在受伤的Vero细胞的表面。

　　图 7 显示了分别时候粘附后对比组和毁伤组维罗细胞内吞的COD晶体的SEM图像。结果证实，平常的Vero细胞拥有更强的吞噬才气。然而，受伤的Vero细胞粘附微晶的才气加强。其余，它们吸取微晶的才气削弱。

　　图 7 正在（A和B）对比组和（C和D）毁伤组粘附后，由非洲绿猴肾上皮细胞内吞的草酸钙二水合物晶体的扫描电镜图像（比例尺= 2μm）正在（A和C）6幼时和（B和D）24幼时粘附后。 肾幼管上皮细胞毁伤可加强肾幼管上皮细胞与尿液微晶的粘附。 31 然而，肾幼管上皮细胞没有被动地接纳毁伤。肾幼管上皮细胞可能内化极少粘附的晶体。一朝进入细胞，晶体将不再袒露于过饱和管状流体或行为晶体集合的潜正在位点，这被视为防范结石酿成的孤独防御。 32 , 33 Lieske等人通过SEM和TEM声明，正在COM晶体粘附正在BSC-1细胞（非洲绿猴肾脏来源的上皮细胞系）的顶端表面的微绒毛上后，内吞感化早正在细胞袒露于晶体后30分钟就发作了内吞感化。 17 很多琢磨证实，细胞毁伤或者是由晶体内吞感化激励的。 17 , 18 , 34 COM晶体可能孤独主动内吞，也可能由Madin-Darby犬肾细胞行为集合体。 22 晶体与表面的微绒毛和纤毛搀和，相邻的细胞正在机闭上发作了变动。

　　通过ICP（ 图 8 ).毁伤组粘附的微晶量明显高于对比组。十分是12幼时后，差异进一步增添。况且，粘附正在对比组的COD微晶量随粘接时候的耽误而慢慢推广，而粘附正在毁伤组上的COD微晶量随时候推移急速推广。

　　图 8 草酸钙二水合物微晶正在分别粘适时候粘附正在细胞表面的量。缩写：h，幼时。 对比组COD与Vero细胞粘附流程中，SEM图像上MDA含量、OPN表达和粘附微晶量的对照以及ICP结果显示，正在粘附的早期阶段（2~6 h），MDA含量（ 图 4B ） 和 OPN 表达式 （ 图 4C ） 急速推广。比拟之下，COD正在Vero细胞表面的粘附量仅正在12幼时后显着推广（ 图2C、D 和 8 ).这一结果的起因是对比组的细胞正在与COD微晶互相感化6幼时后明明受损，导致MDA含量和OPN分子表达升高。然而，COD和Vero细胞之间的粘附是一个从定量到质变的流程。细胞毁伤后，粘合剂分子（如OPN和磷脂酰丝氨酸）被表达出来。然而，细胞表面这些分开的OPN和磷脂酰丝氨酸分子不易粘附正在COD微晶上。惟有当这些带负电荷的分子集合正在一齐并酿成高密度的负电荷区域时，它们才干有用地集合COD晶体。 25 同时，粘附量的推广被推迟了，由于这些分子需求极少时候才干集合正在一齐。 OPN和其他带负电荷的分子的表达是加强毁伤Vero细胞粘附才气的紧要起因。OPN的分子链中含有一个富含天冬氨酸的区域，称为poly-Asp86-93机闭域。Chien等人报道，poly-Asp86-93机闭域是OPN分子和COD晶体互相感化的中央。 35 拥有高电荷密度的Poly-Asp86-93肽正在溶液中呈线性和非机闭化，其功用侧链没有特定的目标。然而，聚Asp86-93肽正在吸附正在（110）面Ca之后，或者会以各样构象粘附正在晶体表面上。2+-充足的COD晶体的晶体平面。这种粘附首要通过天冬氨酸和Ca中四个或五个羧基之间的强静电组合介导的。2+晶体表面上的离子。他们的晶格成亲度也很高。 正在没有尿石症的平常个人的尿液中，细胞表面临COD微晶的粘附才断气顶弱，由于它们的肾幼管上皮细胞没有受伤。然而，患有肾结石的患者的肾幼管上皮细胞通常受伤。结果，微晶与毁伤细胞之间的粘附力大大加强。粘附的晶经验对肾幼管上皮细胞爆发进一步的损害，从而推广肾结石酿成的危险。 转到(G)：

　　毁伤组150±50 nm的亚微米COD与毁伤组Vero细胞的粘附才气明明强于对比组COD和Vero细胞，十分是正在前6h。结果，粘附正在细胞表面的COD微晶量明明推广，zeta电位升高，荧光强度下降，由于OPN分子被COD笼罩，死灭细胞不行平常事务。正在粘附流程中，COD微晶或者会对对比和毁伤的Vero细胞爆发进一步的毁伤。结果，粘附正在受伤上皮细胞上的COD微晶量推广，这正在早期肾结石的酿成中很紧要。本琢磨的结果证实，采用干涉方法戒备或减轻肾幼管细胞毁伤的有用手段，可戒备早期肾结石酿成。